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細胞攻略 | THP-1(人單核細胞白血病細胞)細胞培養教程

更新時間:2023-07-24瀏覽:707次

細 胞 基 本 信 息



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細胞正常生長形態照片

 


細胞名稱:THP-1(人單核細胞白血病細胞)

細胞別稱:THP1; THP 1; THPI; THP-1(ATCC); Tohoku Hospital Pediatrics-1

細胞貨號:  SNL-044

生長特性:  懸浮

培養條件:  1640+10%FBS+0.05mM β-mercaptoethanol+1% P/S

培養環境:  空氣,95%;二氧化碳 (CO2),5%

細胞簡介:THP-1細胞從一名1歲的患有急性單核細胞性白血病的男孩的外周血中分離建立,細胞可以吞噬乳膠顆粒和激活的紅細胞,細胞膜和胞漿內均沒有免疫球蛋白,表達C3R和FcR。THP-1細胞可受佛波酯、TPA誘導向單核系方向分化。THP-1細胞可以用于3D細胞培養、免疫系統紊亂、免疫學和毒理學研究,也是一種合適的轉染宿主。

 

 

THP-1細胞培養注意事項

 

 

THP-1細胞懸浮圓形生長,偶有小聚團,屬于正?,F象,無需吹散;


 圓形透亮、細胞膜完整的細胞是活細胞,如果無法判斷,可以取少量細胞用臺盼藍染色后計數確定細胞活率;


少量細胞附著瓶底屬于正?,F象,可將懸浮細胞轉移至新瓶,丟棄貼壁的細胞;


THP-1喜歡偏酸環境,培養基呈橘色時可不用換液,補充適量新鮮培養基維持一天再進行換液或傳代操作;


THP-1有密度依賴性,密度低時生長較慢,培養密度維持在30萬-100萬細胞/mL之間為宜,超過80萬細胞/mL即可傳代;


THP-1復蘇后恢復較慢,如無特殊情況,復蘇后48小時內不對細胞進行操作;


THP-1生長需要穩定的環境,不頻繁拿出培養箱,不頻繁離心;


培養時瓶子豎立放置(瓶蓋朝上),可增加細胞局部密度,促進細胞增殖。


β-巰基乙醇可以消除活性氧自由基,維持細胞高密度生長。若培養基中不添加β-巰基乙醇,長期培養細胞可能會出現大量貼壁,嚴重聚團等情況。

 



THP-1 細 胞 換 液 方 法

 



離心換液法:

1.  準備所需的培養基、離心管以及無菌槍頭等;(培養基提前預熱)

2.  將所有細胞懸液轉移至離心管中;

3.  900-1000rpm,3min離心;

4.  棄上清,加5mL PBS輕輕重懸細胞進行潤洗,再900-1000rpm,3min離心;

 

Tips:此處PBS潤洗是為了去除細胞碎片,平時培養若細胞碎片不多可以忽略此步驟,若碎片偏多,可以重復潤洗2次。

 

5. 培養瓶中加入適量新鮮培養基;

6. 離心完成后棄上清,加適量新鮮培養基輕輕重懸細胞沉淀,將細胞懸液接種回培養瓶中,混勻細胞,放入培養箱中繼續培養。

 



半換液法:

1.  準備所需的培養基、離心管以及無菌槍頭等;(培養基提前預熱)

2.  將培養瓶豎立靜置一段時間,待細胞沉底;(肉眼觀察細胞沉底情況)

3.  小心吸出一半的培養基,轉移到離心管;

4.  900-1000rpm 3min離心,離心管里若有細胞,則用新鮮培養基重懸后放回原瓶;

5.  原瓶補充一半的新鮮培養基。

 

Tips:半換液2-3次后需要進行離心換液。

 

 

THP-1 細 胞 傳 代 方 法

 

離心法:

1.  取少量細胞懸液進行計數確定細胞密度,密度80萬/mL以上傳代,并根據計數結果確定傳代比例;

2.  準備所需的培養基、離心管以及無菌槍頭等;(培養基提前預熱)

3.  用移液器吸取培養瓶內細胞懸液轉移至離心管中;

4.  900-1000rpm,3min離心收集細胞;

5.  在培養瓶中加入適量新鮮培養基;(T25推薦10mL,T75推薦15mL)

6.  離心完成后,棄離心管內上清,然后加入適量新鮮培養基,輕輕重懸吹散細胞,將細胞懸液均勻接種至培養瓶中,輕輕混勻后將細胞放入培養箱中繼續培養。

 

Tips:懸浮細胞通常都偏脆弱,注意控制吹打力度盡可能輕柔和離心轉速以及時間不要過高,避免細胞受機械損傷。

 

 

直接分瓶法:

1.  取少量細胞懸液進行計數確定細胞密度,密度80w/mL以上傳代,并根據計數結果確定傳代比例;

2.  輕輕搖晃培養瓶,使細胞均勻分散;

3.  用移液器吸取培養瓶內細胞懸液,均分到若干個新培養瓶中,每瓶再補充適量的新鮮培養基,輕輕混勻后將細胞放入培養箱中繼續培養。

 

Tips:用直接分瓶法傳代1-2次后需進行離心傳代。

 

 

THP-1 細 胞 凍 存 方 法

 

 

1.  取少量細胞懸液進行計數確認細胞密度。

 

Tips:若凍存前培養基已經變黃,先換液靜置培養4h左右,待細胞活力穩定后再進行凍存。

 

2.  準備所需的培養基、PBS、血清、DMSO、離心管以及無菌槍頭等;(試劑需提前預熱)

3.  根據收集到細胞量,配制相應量的凍存液,并準備相應數量的凍存管,在凍存管上標志細胞名稱,代次,凍存時間等信息。推薦凍存液配方:90%FBS+10%DMSO;凍存密度200-300萬細胞/mL/管。

 

Tips:凍存密度過低將導致復蘇后狀態不佳。

 

4.  將細胞懸液轉移至離心管中1000rpm,3min離心收集細胞;

5.  離心完成后棄上清,加入相應量的配置好的凍存液輕輕重懸混勻細胞,將細胞懸液分裝至凍存管中。注意吹打力度,不要產生過多氣泡;

 

Tips:加入凍存液混勻細胞后及時分裝并將細胞降溫凍存,以減少DMSO對細胞的毒性。

 

6.  將細胞放置程序降溫凍存盒中,再將凍存盒轉移至-80℃冰箱進行降溫凍存。

7.  次日復蘇一管檢查凍存效果,確認沒問題后及時將凍存細胞放置液氮中保存,細胞在-80℃冰箱放置時間不要超過3天。

 




THP-1 細 胞 復 蘇 方 法

 

1.  提前將水浴鍋預熱至37℃,培養基復溫至室溫或37℃,離心機設置好轉速;

2.  將凍存細胞從液氮或-80℃冰箱中取出,迅速置于37℃水浴,快速搖晃至完*融化,融化時間1min左右;

 

Tips:若液氮或冰箱距離細胞房較遠,細胞需要放在干冰或冰盒上運送至細胞房。

 

3.  直接將凍存管900-1000rpm 2min離心,同時在培養瓶中加入適量新鮮培養基;

4.  離心完成后棄上清,吸取1mL新鮮培養基輕輕重懸細胞,吹散細胞后接種到培養瓶中;

5.  使用十字法或8字法將細胞混勻后置于培養箱中培養。

 

Tips:整個細胞復蘇過程在盡可能5-10min內完成。

 

 

THP-1 細 胞 收 貨 攻 略

 

1. 拆封包裝盒,確認細胞,說明書等是否齊全,收貨細胞名與所購買細胞是否符合;

2. 觀察細胞培養瓶是否完好,有無漏液,培養瓶內培養基是否有肉眼可見的絮狀物或者渾濁等,發現異常及時拍照聯系銷售人員;

3. 確認無異常后,將培養瓶表面消毒,然后撕掉封口膜豎立放入培養箱平衡4h左右,讓懸浮細胞沉下培養瓶底部;

4. 平衡過程中可以仔細閱讀細胞說明書,知悉細胞所需培養體系,培養環境以及培養注意事項等;

5. 平衡完成后豎立取出細胞培養瓶,此時大部分細胞沉在培養瓶底部,小心吸取上清至離心管中,保留10mL左右培養基在培養瓶內,小心操作,盡量不要吸到沉在底部的細胞;

6. 將離心管1200rpm,5min離心收集未沉下培養瓶底部的細胞,上清可以4℃保存,后續用于培養細胞,以平穩過度到自己的培養基。將收集到的細胞接種至原培養瓶;

7. 輕輕混勻細胞,取100-200ul細胞懸液進行計數,根據計數結果調整細胞培養密度。然后置于培養箱中培養。



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